Centre national de référence Brucella (CNR) Laboratoire Expert

Apporter une expertise microbiologique : 

• contribuer au développement de nouvelles techniques diagnostiques, à leur évaluation et à leur diffusion, 
• apporter son expertise aux laboratoires de biologie médicale pour le diagnostic des brucelloses (isolement, détermination de l’espèce, confirmation du diagnostic sérologique),
• collaborer avec des laboratoires experts en santé animale (échange d’informations, échanges de souches, comparaison des caractéristiques des souches d’origine humaine, alimentaire et animale, développement d’études en commun, etc.).

Contribuer à la surveillance épidémiologique en lien avec Santé Publique France :

• en développant un réseau de laboratoires collaborateurs sur l’ensemble du territoire, 
• en signalant à Santé Publique France les cas identifiés au CNR,
• en contribuant à l’investigation des cas groupés, 
• en collaborant avec les réseaux de surveillance internationaux et en particulier européens notamment dans le cadre de l’application de la directive zoonoses 2003/99/CE. 

Contribuer à l’alerte en signalant à Santé Publique France tout événement inhabituel : 

• augmentation du nombre de cas, 
• apparition de cas groupés, 
• modification des formes cliniques (répartition, modification de leur expression clinique, formes inhabituelles), 
• introduction de souches habituellement non présentes en France, etc.

Contribuer aux travaux du réseau national des laboratoires Biotox :

• apporter son expertise spécifique au service des instances concernées de santé publique, de défense et de sécurité nationale
• contribuer avec les instances chargées de leur pilotage, à l’animation du réseau des laboratoires Biotox 
• contribuer à la mise en place d’une collection nationale de souches des agents de la menace pour les besoins de la biodefense.

Réalisation de prélèvements : 

Le diagnostic de certitude de la brucellose demeure fondé sur l’isolement en culture des Brucella par la réalisation d’hémocultures aérobies nécessitant plusieurs jours d’incubation des cultures. Lorsque les cultures sont négatives ou non réalisées, un prélèvement sanguin permet d’effectuer les sérologies pour confirmer un diagnostic. 

Sachez que l'’isolement des Brucella nécessite des conditions de culture et de sécurité particulières pour éviter la transmission par voie respiratoire ou transconjonctivale de la maladie chez le personnel de laboratoire. Ces cultures doivent être réalisées en laboratoire de sécurité biologique de niveau 3 (NSB3).

Il est important de noter que les prélèvements doivent être réalisés avant tout traitement antibiotique et le transport des prélèvements vers le laboratoire doit être rapide. 

Identification des espèces :

• par examen direct avec la coloration de Gram
• en milieux de culture nécessitant un certain temps d’incubation
• diagnostic d'espèces par isolement d’une souche bactérienne et méthodes phénotypiques
• classification des espèces par outils de biologies moléculaire
• diagnostic génomique par amplification génique
• diagnostic protéique par spectrométrie de masse 
• étude de la sensibilité aux antibiotiques

PCR : Polymerase chain reaction / réaction en chaîne par polymérase

La réaction en chaîne par polymérase (PCR) est une technique clé dans le diagnostic de la brucellose, notamment lorsque l’administration d’une antibiothérapie empêche l’isolement de Brucella. Elle permet d’amplifier l’ADN bactérien à partir de divers prélèvements (sang, biopsies, liquide céphalorachidien…). Plus rapide que l’hémoculture, elle offre une sensibilité variable selon les méthodes utilisées. 

La PCR limite aussi le risque d’infection pour le personnel de laboratoire. Toutefois, sa fiabilité peut être affectée par des inhibiteurs ou des contaminations. Des techniques avancées, comme la PCR multiplex, permettent d’identifier précisément les espèces de Brucella, mais restent principalement du ressort des laboratoires spécialisés.

Sérologie

1. la technique d’agglutination en tube ou séroagglutination de Wright (SAW) 
2. la technique d’agglutination sur lame ou épreuve de l’antigène tamponné (EAT) (ou test au Rose Bengale) 
3. la technique d'immunocapture Brucellacapt 
4. détection IgM et IgG par ELISA

Le CNR des Brucella travaille en étroite collaboration avec le Laboratoire Nationale de Référence pour les brucelloses animales, Laboratoire de Santé Animale de Maisons-Alfort de l' Agence Nationale de Sécurité Sanitaire Alimentation, Environnement, Travail (ANSES) : échange d'informations, échange de souches, comparaison des caractéristiques des souches d'origine humaine, alimentaire et animale, études épidémiologiques en commun . 

Contact :
14, rue Pierre et Marie Curie, 94706 Maisons-Alfort cedex
Tél : +33 1 49 77 13 00
Directeur : Claire Ponsart 
Tél : +33 1 49 77 13 23
Vers le site du Laboratoire National de référencec